本试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的孔雀石绿结晶紫和微孔条上预包被的偶联抗原竞争孔雀石绿抗体.(1) 酶标板: 96 T8孔(2) 标准品液:(1.0 mL瓶)0 ppb、0.05 ppb、0.15 ppb、0.45 ppb、1.35 ppb、4.05 ppb。(3) 酶标记物: 1瓶(12 mL)。(4) 抗体工作液: 1瓶(7 mL)。(5) 底物缓冲液: 1瓶(7 mL)。(6) 底物液: 1瓶(7 mL)。(7) 终止液: 1瓶(7 mL)。(8) 20倍浓缩洗液:1瓶(50 mL)加蒸馏水稀释到1000 mL。(9) 1 mgmL标准品液:(0.2 mL)。(10) 提取液A (50 mL)(11) 提取液B (50 mL)(1)将标准品、样品所需微量反应板(均需2个平行试验)放在反应架上。(2)加入50μl的标准液或处理好的样品到各自的微孔板中。(3)加入50μl已稀释的抗体应用液加入微量反应板,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后,室温下反应20分钟。(4)弃去孔中液体,并将微孔板剩余残液在吸水纸上拍干。每孔注满稀释好的洗液,轻轻振荡,放置2分钟,弃去孔中液体,并在吸水纸上拍干,重复5次。(5)加入100μl酶标记物应用液到微孔板中,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后, 室温下反应15分钟。(6)弃去孔中的液体,并在吸水纸上拍干,每孔注满稀释好的洗液,轻轻振荡,放置2分钟,弃去孔中液体,并在吸水纸上拍干,重复5次。(7)加底物缓冲液50μl,再加入底物液50μl,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后,在室温避光处孵育10分钟。(8)加入50μl终止液到微孔板中,混合好在450nm处测量吸光度值,在加入停止液后10分钟内读取光度值。
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