本试剂盒采用固相酶联免疫吸附ELISA原理，通过黄曲霉毒素B1(AFB1)抗原和曲霉毒素B1(AFB1)抗体。1 . 脂肪含量低的固体样品（如大米、玉米、小麦和饲料等）1、称取5 g 粉碎样品于100 mL带塞三角瓶内，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液。2、将加入了甲醇水溶液的样品放入振荡器内（或用手强力振荡），充分振荡3 min后，用滤纸过滤，收集滤液。3、取滤液2 mL，加入6 mL 20 %甲醇水溶液，混匀，用whatman 1号滤纸过滤，此为样品待检液。2．酱油、醋1、称取5 g样品于25 mL小烧杯中，用10 mL蒸馏水将试样转移到125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞轻轻振摇3 min，静置分层。2、放出下层三氯甲烷层，取5 mL于20 mL蒸发皿中，65 ℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入5 mL 60%甲醇水溶液，将蒸发皿中的凝结物充分溶解。3、取溶解液2 mL，加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。3．食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）1、称5 g油样于25 mL小烧杯中，用20 mL石油醚或正乙烷分次将试样转移至125 mL分液漏斗中，准确加入25 mL 60%甲醇水溶液溶液，加塞轻轻振摇5 min，静置分层，放出下层60%甲醇水提取液。2、取提取液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。4．酒类1、称取5 g样品于125 mL分液漏斗中，加入25 mL三氯甲烷，加塞轻轻振摇3 min，静置分层。2、放出下层三氯甲烷层，取5 mL于20 mL蒸发皿中，65 ℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入5 mL 60%甲醇水溶液，将蒸发皿中的凝结物充分溶解。3、取溶解液2 mL，再加入6 mL 20%甲醇水溶液，混匀，此为样品待检液。操作说明：1．将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25 ℃）平衡30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。2．按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。3．加标准品样本50 μL 孔，然后加抗体工作液50 μL 孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，室温下环境反应40 min。4．洗板4-5次，每次浸泡30 s，拍干。5． 加入100 μL酶标记物应用液到微孔板中，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，室温下反应20分钟。6．弃去孔中的液体，并在吸水纸上拍干，每孔注满稀释好的浓缩稀释液，轻轻振荡，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复4次。7．显色：每孔加入底物缓冲液50 μL，再加底物液50 μL，轻轻振荡混匀，室温环境下避光显色10 min。8．测定：每孔加入终止液50 μL，轻轻振荡匀，设定酶标仪于450 nm处（在20 min内读完数据），测定吸光度值。