本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的苏丹红和微孔条上预包被的偶联抗原竞争苏丹红抗体1、微量测试孔：96T2、 标准品液：（1ml瓶） 0ppb、0.4ppb、3.2ppb、6.4ppb、12.8ppb、25.6ppb3、 酶标记物 12ml4、 抗体工作液 7ml5、 底物缓冲液破 7ml6、 底物液 7ml7、 终止液 7ml8、 20倍浓缩洗涤液 50ml9、1mgml标准品液：（0.2ml）操作说明1. 将试剂盒从冷藏环境中取出，置于室温（20～26℃）下平衡30min以上，将需用的条板固定于支架，按顺序编号；2. 洗液配制：将50 mL浓缩洗涤液（20倍浓缩）用去离子水稀释至1000 mL备用。（或按需量稀释）3. 标准品的配制：先将试剂盒中的1 mgmL苏丹红标准品用洗液稀释1000倍，变成1000ngmL，再用洗液将1000 ngmL的标准品分别稀释成0.4 ngmL， 3.2 ngmL，6.4 ngmL，12.8 ngmL，25.6 ngmL。（现配现用）4. 在标准品孔中加入50 μL标准品，样品孔加入50 μL待测样品，然后每孔加入50 μL抗体（加入标品和样品时无时间差的影响），轻拍混匀，37℃下孵育30min；5. 倒出孔中的液体，以试剂盒浓缩洗液稀释20倍后作为洗液，用洗板机洗涤4～6遍；没有洗板机的用户可用300 μL洗液充入各孔中，静置20 s，倒出孔中的液体，将微孔架倒置，在吸水纸上连续拍打3次以上，以保证完全除去孔中的液体，重复操作4～6遍；6. 每孔加入酶标记物100 μL，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置37℃ 环境中反应20 min ，取出重复洗板步骤。7. 显色：每孔加入底物缓冲液50 μL，再加底物液50 μL．轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，置37℃ 环境中反应10 min。8. 测定：每孔加入终止液50 μL，轻轻振荡混匀．设定酶标仪于450 nm处（建议用双波长450630 nm 检测，在20 min内读完数据），测定每孔OD 值，根据标准曲线计算样品浓度。