本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物己烯雌酚和微孔条上预包被的偶联抗原竞争己烯雌酚抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物己烯雌酚的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物己烯雌酚的含量。规 格：96孔盒 灵 敏 度： 0.1ppb 检测时间： 75min 样本定量检测下限 组织（虾、鱼）……………………………………0.2ppb 猪肉肝 鸡肉肝 …………………………………… 2ppb 饲料………………………………………………… 20ppb 尿液…………………………………………………0.6ppb 交叉反应率 己烯雌酚…………………………………………… 双烯雌酚…………………………………………… 40% 己烷雌酚…………………………………………… 8% 己炔雌二醇………………………………………﹤0.1% 雌三醇……………………………………………﹤0.1% 样本回收率 饲 料……………………………………………90±10% 组 织……………………………………………85±10% 尿 液……………………………………………70±10%处理任何样本时，都必须注意：

（a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。 （b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。 样本前处理需配制： 配液1、6M H3PO4 溶液 100ml 浓H3PO4（含量85%）加去离子水150ml混合均匀。 配液2、1M NaOH 溶液 4g NaOH加去离子水100ml溶解。 配液3、2M NaOH 溶液 8g NaOH加去离子水100ml溶解。 配液4、乙腈-丙酮混合液 V乙腈-V丙酮 = 4 : 1 配液5、将5X浓缩复溶液用去离子水按照1：4稀释（1份浓缩复溶液+4份去离子水）用于样本的复溶。 （a）饲料样本 1、 称取2±0.05g捣粹后的饲料样本，加入8ml乙腈，振摇5min，15℃，4000rmin以上，离心10min； 2、 取2ml上清液，60℃氮气空气吹干； 3、 加入0.5ml氯仿，涡动20s，加入2ml 1M NaOH，涡动30s，4000rmin以上，离心5min； 4、 取1ml上清液，加入100μl 6M H3PO4，涡动5s； 不同样本按如下方法稀释： 配合料：取50μl，加入950μl稀释后的复溶液，涡动混匀30s，取50μl 用于检测。 浓缩料预混料：取25μl，加入975μl稀释后的复溶液，涡动混匀30s，取50μl 用于检测。 样本稀释倍数： 配合料稀释倍数：100 浓缩料、预混料稀释倍数：200 （b）组织（鸡肉肝、猪肉肝、虾、鱼） 1、 称取2±0.05g匀浆后的样本，加入6ml乙腈-丙酮混合液，振摇5min，15℃，4000rmin以上，离心10min。 2、 取3ml上清液，60℃氮气空气吹干。 加入0.5ml氯仿，涡动20s，加入2ml 2M NaOH，涡动30s，4000rmin以上，离心5min。 3、 取1ml上清液，加入200μl 6M H3PO4，涡动5s。 4、 加入3ml乙腈萃取，振荡5min，室温4000rmin以上，离心10min，取上层有机相， 60℃氮气空气吹干。 5、 用1ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，混匀30s。 不同样本按如下方法稀释： 虾鱼：直接取50μl水相用于检测。 猪肉肝、鸡肉肝：取50μl水相加入450μl稀释后的复溶液，涡动混合30s；取50μl用于检测。 样本的稀释倍数： 虾鱼稀释倍数：2 猪肉肝、鸡肉肝稀释倍数：20

（c）尿液 1、 取2ml尿液到离心管中，室温4000rmin以上，离心10min，直至清亮； 2、 移取1ml清亮尿液至离心管中，加入1ml?1M NaOH强烈振荡5min； 3、 加入100μl 6M H3PO4，涡动30 s； 4、 再加入8ml氯仿进行萃取，振荡5min。15℃，4000rmin以上，离心10min； 5、 去掉上层的水相，取下层有机相4 ml，60℃氮气空气吹干； 6、 用3ml稀释后的复溶液干燥的残留物，混合30s；取50μl 用于检测。 样本稀释倍数：6