【测定原理】 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物氯霉素和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氯霉素抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含残留物氯霉素的含量成负相关，与标准曲线比较可得出相应残留物氯霉素的含量。氯霉素是一种广谱抗生素，具有很好的抗菌效果，常用于畜牧业生产中，然而，氯霉素会造成人的再生障碍性贫血，而且诱发浓度还没有确定，所以目前已经禁止在动物及食品中使用氯霉素。氯霉素快速检测试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于大批量样品快速检测。 【试剂盒技术指标】 规 格：96孔盒 灵 敏 度： 0.05ppb 检测时间： 75min 样本定量检测下限： 肠 衣………………………………………………0.1ppb 蜂 蜜………………………………………………0.1ppb 牛 奶………………………………………………0.05ppb 尿液、血清…………………………………………0.1ppb 组织、肝脏……………………………………… 0.025ppb 饲 料………………………………………………0.15ppb 样本回收率： 组织、肝脏………………………………………80%±10% 蜂蜜、肠衣………………………………………70%±10% 牛奶、饲料………………………………………85%±15% 尿液、血清………………………………………70%±10%? 交叉反应率 氯霉素……………………………………………… 甲砜霉素…………………………………………… < 0.1% 氟甲砜霉素…………………………………………< 0.1% 【试剂盒组成】 1、 微量测试孔：1×96孔板（12条×8孔） 2、 标准液X6瓶：（1ml瓶） 0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb 3、 酶标记物 12ml……………………红色帽 4、 抗体工作液 7ml…………………… 绿色帽 5、 底物 A 液 7ml…………………… 白色帽 6、 底物 B 液 7 ml…………………… 黑色帽 7、 终 止 液 7 ml…………………… 黄色帽 8、 20X浓缩洗涤液 40ml………………透明帽 9、 2X浓缩复溶液 50ml………………透明帽样本处理前须知 处理任何样本时，都必须注意： （a）本试剂盒所检测的组织样本包括：动物组织、 禽类和水产组织。eg:鸡、鸭、牛、兔、鱼、虾等。 （b）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。 （c）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染，干扰实验结果。 样本前处理需配制： 配液1、C液（牛奶样本使用）： 0.36M 亚硝基铁******（Na2Fe(CN)5?NO?2H2O）10.7g 亚硝 基铁******加去离子水100ml溶解。 配液2、D液（牛奶样本使用）： 1M硫酸锌（ZnSO4?7H2O）28.8g硫酸锌加去离子水100ml溶解。 配液3、 pH4.8 100mM醋酸钠缓冲液（尿样本使用）：称2.4g醋酸钠和1.2ml醋酸加去离子水500ml溶解混合。 配液4、乙腈-水溶液 V乙腈：VH2O＝84：16 配液5、 将2X浓缩复溶液用去离子水按1：1稀释。(1份浓缩复溶掖+1份去离子水，用于抗体的稀释和样本提取后的复溶)。 （a）组织、肝脏样本前处理方法 1、 用均质器均质组织样本； 2、 称3±0.05g样本于离心管中，先加入3ml去离子水充分混匀再加入6ml乙酸乙酯，振荡5min，室温4000rmin以上，离心10min； 3、 取出4ml上层液体在氮气流50-60℃水浴中干燥； 4、 加入1 ml正己烷溶解干燥的残留物，再加1ml稀释后的复溶液强烈振荡混合30s，室温4000rmin以上离心5min。 5、 取50 μl下层相用于分析。 样本稀释倍数：0.5 （b）血清血浆 1、 取1ml血清或血浆至试管中，加2ml乙酸乙酯振荡1min； 2、 静置使水相与有机相分层或室温4000rmin离心5min； 3、 移取上层的乙酸乙酯至另一试管中，用氮气流50℃水浴中干燥； 4、 残留物用1 ml稀释后的复溶液溶解，混合30s； 5、 取50μl用于分析。 样本稀释倍数：1 （c） 尿液 1、 移取2ml尿液到离心管中，加pH4.8 100mM醋酸钠缓冲液0.5ml混合； 2、 加40μl葡萄糖苷酸酶(Merck,Art.No.4114)到稀释的尿液中，在37℃水解至少2小时（或过夜）； 3、 该溶液恢复至室温后加入8ml乙酸乙酯混合1min； 4、 室温4000rmin离心10min，取出4ml上层液体在氮气下50～60℃干燥； 5、 用1ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，混合30s； 6、 取50μl 用于分析。 样本稀释倍数：1 （d）蜂蜜 1、 取2±0.05 g蜂蜜，放入离心管中，用4ml去离子水溶解； 2、 加入4ml乙酸乙酯上下振荡5min； 3、 室温4000rmin以上离心10min； 4、 移取2ml上层清澈液到另一离心管中，50-60℃氮气流下干燥； 5、 用0.5ml稀释后的复溶液溶解，混合30s； 6、 取50 μl用于分析。 样本稀释倍数：0.5 检测下限：0.025ppb 定量下限：0.1 ppb 注：我们0.1 ppb为阳性样本的cut off值。 （e）肠衣 1、 用均质器均质样本注：干样本需剪碎（长度不超5mm）后再均质，湿样本需用去离子水漂洗20min以上(去除表面的盐份)，沥干后再进行均质。 2、 称1±0.05g均质后的样本于离心管中，加入10ml乙酸乙酯，振荡5min，室温4000rmin以上，离心10min。 3、 取出5ml上层液体（相当于0.5g的样本）在氮气流下50-60℃干燥。 4、 加入1 ml正己烷溶解干燥的残留物，再加0.5ml稀释后的复溶液强烈振荡混合30s，室温4000rmin以上，离心5min。 5、 去上层相，取下层50 μl用于分析。 样本稀释倍数：1 （f）牛奶和奶粉 牛奶样本处理方法一 1、 牛奶样本，10℃4000rmin以上离心10min，吸除上层脂肪； 2、 取5ml去除脂肪奶样至离心管中，加入150μlC液出现沉淀，短暂振荡后加入150μlD液混合； 3、 15℃4000rmin以上，离心10min，移取上层液； 4、 用稀释后的复溶液以等体积稀释上层液，混合30s； 5、 取50μl用于分析。 注：如果离心后仍然浑浊，再重复沉淀过程。 样本稀释倍数：2 检测下限：0.1ppb 定量下限：0.15ppb 牛奶样本处理方法二 1、 取5ml去除脂肪奶样至离心管中； 2、 加入250μlC液和250μlD液混合，4-12℃4000rmin以上离心10min。如果没有冷冻离心机，请预先将样本冷却到8℃； 3、 转移出2.2ml上层液（相当于2ml奶样）至一个新的离心管中，加入4ml乙酸乙酯上下振荡5min； 4、 室温（20-25℃）4000rmin以上离心10min ； 5、 转移出2ml乙酸乙酯上层液体（相当于1ml奶样），60℃氮气流下完全干燥； 6、 用0.5ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，混合30s； 7、 取50μl用于分析。 样本稀释倍数：0.5 检测下限：0.025ppb 定量检测限：0.05ppb 由于阴性样本可能会产生背景干扰 （在某些情况下干扰数值在标准2到3之间），所以标准3作为阳性结果的CUT OFF判断值。 奶粉样本处理方法 1、 称2±0.05 g奶粉至离心管中，加入10ml去离子水，振荡溶解； 2、 加1ml C液和1ml D液混合。4-12℃4000rmin以上离心10min。若无冷冻离心机，请预先将样本冷却到8℃； 3、 转移出3.6ml上层液（相当于0.6g奶粉）至一个新的离心管中，加入6ml乙酸乙酯上下来回振荡5min； 4、 室温（20-25℃）4000rmin以上离心10min； 5、 转移出4ml乙酸乙酯上层液体（相当于0.4g奶粉），60℃氮气流下完全干燥； 6、 用0.4ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物，混合30s； 7、 取50 μl用于分析。 样本稀释倍数：1 检测下限：0.05ppb 定量检测限：0.15ppb 由于阴性样本可能会产生背景干扰 （在某些情况下干扰数值在标准2到3之间），所以标准3作为阳性结果的CUT OFF判断值。 （g）蛋类 1、 用均质器低速均质样本(蛋黄或全蛋)； 2、 称取3±0.05 g均质过的样本，与9ml乙腈-水溶液（84︰16；V乙腈︰V水）振荡5min，15℃ 4000rmin以上离心10min； 3、 取3ml上层与3ml蒸馏水混合，加入4.5ml 乙酸乙酯混合5min，15℃4000rmin以上离心10min； 4、 将上层有机相转移到试管中50℃下氮气吹干； 5、 加入1ml正己烷溶解残留物后，用2ml稀释后的复溶液混合30s，离心去除正己烷。 6、 取50 μl用于分析。 样本稀释倍数：2 检测下限：0.1ppb 定量检测限：0.3ppb （h）饲料 1、 称取2±0.05g均质过的饲料样本，加入2ml去离子水，再加入6ml乙酸乙酯，充分振荡2min，15℃ 4000rmin以上离心10min； 2、 取2ml上层有机相到试管中56℃下氮气吹干； 3、 加入1ml正己烷溶解残留物，用1ml稀释后的复溶液混合30s，离心去除上层正己烷。 4、 取50 μl用于分析。 样本稀释倍数：3 检测下限：0.15ppb