应用高通量的芯片检测技术，一次检测即可完成24种高危、低危型诊断? 准确诊断现症单一型别或混合多种型别感染的诊断? 通过多次检测，准确诊断感染为瞬时感染或持续感染，为是否致癌或致癌，提供准确诊断依据? 适用于人乳头状瘤病毒感染的所有疾病确诊诊断。如男女生殖器HPV感染等。? 流行病学调查及家庭遗传特点分析和研究? 检测通量高，是国内外耗时短的检测方法，PCR后1小时内即可检出全部24个型别。 准确识别单一或多种型别的混合感染，优于某些国际品牌产品，不能准确分辨单一感染。 特异性好，能准确识别检测核酸分子中一个碱基的差异。 不同于某些国际品牌产品，适于临床上关键的是否持续感染的准确诊断。 灵敏度高。检测下限为5×103copiesml。 重复性好。 操作简单，杂交过程简单，检测时间短，3小时内完成所有检测。 无需大型设备，有本试剂盒即可为病友服务。配备相应设备，可进行批量化检测 产品操作说明：

(网址为：e=)人乳头状瘤病毒基因分型检测试剂盒（基因芯片法）使用说明书(网址为：e=)

【产品名称】

通用名称：人乳头状瘤病毒基因分型检测试剂盒（基因芯片法）

商品名称：人乳头状瘤病毒基因分型检测试剂盒

英文名称：Human Papillomavirus Genotyping Kit（Gene Chip Assay）

【包装规格】 21人份盒

【预期用途】人乳头状瘤病毒（HPV）可以通过多种途径感染生殖道，从而导致尖锐湿疣以及宫颈病变，甚至可能引起宫颈癌的发生。从高危型HPV的持续感染到一般的宫颈癌前病变终发展为宫颈癌大约需要5～10年。因此，有针对性地进行HPV分型检测对于宫颈癌的早期诊断和治疗有重要意义。本试剂盒用于定性检测宫颈样本中的HPV24种基因型，其中包扩HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73型共17种高危型，及HPV6、11、42、43、44、82、84型共7种低危型别，适用于HPV感染的辅助诊断。

【检验原理】

本试剂盒系采用PCR技术扩增HPV的特定基因片段，再与芯片上特异性核酸探针杂交以区分特定的基因型别的技术。

根据HPV基因特点设计特异性引物，可以扩增出包含24种HPV基因型的目的片段，再将扩增产物与固定再基因芯片上的包含17种高危型和7种低危型在内的分型探针杂交，依据信号的有无来判断是否有这些HPV基因型的存在。

【主要组成成分】

组成

规? 格??

数量

成份

试剂盒Ⅰ

HPV分型检测芯片

3人份片

7

氨基化芯片基片、 寡核苷酸

直用型显色液

2ml

1

显色底物

100×洗涤液A

10ml

1

SDS、SSC

200×洗涤液B

10ml

1

SSC

试剂盒Ⅱ

直用型PCR反应液

20μl管

21

dNTPs、引物、Taq 酶

直用型杂交液

2ml

1

SSC， SDS，Triton X–100

直用型BW反应液

2ml

1

SSC、HRP配体

HPV阳性对照品

100μl

1

灭活HPV-11型 阳性样本

HPV阴性对照品

100μl

1

灭活HPV阴性样本

样本处理液

1.1ml

1

NaCl 、Tris、β-巯基乙醇

【储存条件及有效期】??

试剂盒Ⅰ组成成份在2℃-8℃下可保存12个月；试剂盒Ⅱ组成成份在-15℃以下可保存12个月；试剂盒开封后要在一个月内使用完毕；试剂盒Ⅱ组份反复冻融不能超过3次；运输过程要使用干冰或冰袋，使试剂保持在不高于0℃的条件下。?

【适用仪器】PCR 扩增仪( Hema 9600)；基因芯片阅读仪(Sinochips-PGA)

【样本要求】 检查前准备：月经正常妇女，在月经来潮后10～18天为佳检查时间；检查前48小时内不要作阴道冲洗，不要用避孕药膏等阴道内用药物；检查前48小时好不应有性生活；检查前不进行醋酸或碘液涂抹。 采集方法： 以专用宫颈脱落细胞采集器进行采样。医护人员先以窥阴器或阴道张开器暴露宫颈，用棉拭子将宫颈口过多的分泌物擦去。取出宫颈刷置于宫颈口，单方向旋转4～5周以获得足量的上皮细胞样本，然后将宫颈刷头部放入洗脱管中，延刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，旋紧洗脱管盖，做好样本标识，保持洗脱管质粒放置。??????????

标本保存： 样本一经采集，则应尽快送检；标本室温保存不应超过12小时，2～8℃保存不超过7天，-20℃保存不超过3个月。避免反复冻融。

标本运输：冰壶或泡沫箱加冰袋密封运输，在途时限不宜超过48小时。

【检验方法】

1.? 样品处理

1.1?????? 取临床标本，加入1ml生理盐水溶解，震荡混匀后全部转移至1.5ml离心管中；

1.2?????? 12000rpm离心10min，弃上清，留沉淀；

1.3?????? 加50μl的样本处理液，100℃煮沸 10min；

1.4?????? 12000rpm离心10min备用。

1.5?????? 阳性对照、阴性对照融化混匀离心后直接取50μl，然后进行1.3,1.4步骤。

2.? 目的片段的PCR扩增

2.1?????? 取出直用型PCR反应液，在室温（25℃）下融化并2000rpm离心10s备用；

2.2?????? 按顺序放置，取上述制备的样本组织液5μl，按顺序加入上述PCR管中；

2.3?????? 将上述PCR扩增管2000rpm离心10s，避免管壁挂珠；

2.4?????? 按照以下条件进行扩增：94℃变性10min；94℃,30s?? ?45℃,60s??? 72℃,30s 进行40个循环；72℃延伸10min后4℃密封保存备用。

3.? 基因芯片检测

3.1?????? 分别将100×洗涤液A、200×洗涤液B用双蒸水稀释得到1×洗涤液A、B（均可以在室温下存放）；

3.2?????? 将 PCR扩增产物99℃加热10min，迅速置于冰浴中5min；

3.3?????? 取 10μl上述冰浴中PCR 扩增产物至100μl直用型杂交液中，混匀；揭开芯片保护膜，将上液加入基因芯片孔中，覆盖芯片表面；

3.4?????? 加样后的芯片45±1.5℃水浴25min，然后在室温下放置5min，使其冷却至室温；

3.5?????? 用预热至50±1.5℃的1×洗涤液A浸泡芯片1min，旋转3圈；后，用空气将芯片表面液滴吹净(注意：一定要迅速将表面液滴吹净)；

3.6?????? 取直用型BW反应液适量（100μl-120μl）覆盖于芯片表面，并在室温（30-37℃）下反应10min；

3.7?????? 用预稀释的1×洗涤液B（15-35℃），冲洗芯片3次；用洁净空气吹干芯片表面；

3.8?????? 将直用型显色液2-3滴滴加在干燥的芯片表面，并使其覆盖全片，避光常温下反应5min；

3.9?????? 用预稀释的1×洗涤液B冲洗芯片3次，用洁净空气吹干芯片表面，应用芯片自动分析报告系统进行判读或数码照相后自行判读。

【参考值（参考范围）】本产品为定性产品，芯片上HPV各型别对应位置肉眼判断出现蓝色信号或使用分析报告系统检测HPV各型别信

号位置灰度值与背景灰度值差大于4，代表存在该感染有该型别HPV，信号斑点颜色有深浅，均代表阳性，不能根据深浅进行定量。

【检验结果的解释】? HPV基因芯片探针矩阵示意图（基因芯片上每种型别探针重复两个点，左侧示意图代表右侧矩阵中每个探针型别）：

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HPV44

HPV26

质控探针

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HPV42

HPV43

阳性探针 ?

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HPV6

HPV31

质控探针

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?

HPV11

HPV33

阳性探针

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HPV16

HPV18

质控探针

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?

HPV35

HPV39

阳性探针

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?

HPV52

HPV56

质控探针

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?

HPV66

HPV51

阴性探针.

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?

HPV45

HPV58

质控探针

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?

HPV53

HPV59

阴性探针.

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?

HPV73

HPV68

质控探针

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?

HPV82

HPV84

阴性探针

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【检验方法的局限性】

1.本试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。

2.不合理的样本采集、转运及处理、样本中病毒滴度过低均有可能导致假阴性结果。

3.未经验证的其他干扰或PCR抑制因子可能会导致假阴性结果。

【产品性能指标】

根据特异性验证试验数据以及临床研究中大量对比试验结果我们确定如下性能指标：

1.??????? 低检出量：单一型或混合型样本，本品能稳定检出的HPV的病原体小拷贝数为5×103copiesml；

2.??????? 分析特异性：与测序方法相比较符合率达到95％以上，HPV24种型别间无相互交叉，与CMV，HSV，TP，CT，UU，NG等病原体间无交叉反应。

3.?? 重复性：一份样本10次重复检测，阴阳性无差异。

【注意事项】

1.???? ?有关实验室管理规范请严格按照行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理规范执行。

2.???? ?本试剂盒的阳性质控经60℃活一个小时,但仍视为具有潜在生物危害性的物质,要做好防护。

3.???? ?本试剂盒仅用于体外诊断。

4.??????? 芯片杂交区应与PCR扩增区严格分开。

5.??????? 各区物品均为专用，不得交换使用，避免污染，每次实验完后立即清洁工作台。

6.??????? 加样时应使样品完全放入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快盖紧管盖。

7.??????? 扩增完毕请立即取出反应管，密闭在专用塑料袋中，放于指定地点，等待同意处理。

8.??????? 使用后的扩增产物应在取样后置于密封袋中。

9.??????? 实验中用过的吸头请直接打入盛有1%的次氯酸钠的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。

10.???? 工作台及各种实验用品应定期用1%的次氯酸钠、75%酒精或紫外灯进行消毒。

11.???? PCR反应液应避光低温保存。

12.???? 不同批号的试剂请勿混用，并请在有效期范围内使用。

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【参考文献】

1.???? 《体外诊断试剂说明书编写指导原则》

2.???? 《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》

3.????????? Hubbard RA. Human papillomavirus testing methods. Arch Pathol Lab Med 2003;127:940-945.

4.????????? Molijn A, Kleter B, Quint W, van Doorn LJ. Molecular diagnosis of human papillomavirus (HPV) infections. J Clin Virol 2005;32 Suppl 1:S43-51.

5.????????? 宋家武等 高灵敏度薄膜生物传感器基因芯片系统的研制 世界华人消化杂志 2008;16（15）：1628－1633

【生产企业】

企业名称：珠海赛乐奇生物技术有限公司?? ?????????网址：http:www.sinochips.cn?????? 邮政编码：519000 地址：广东省珠海市金鼎金峰西路24号2栋4层??? ?电话：0756-3627708 ??????????????传真：0756-3318499

【医疗器械生产企业许可证编号】 粤食药监械生产许20081575号

【医疗器械注册证书编号】?国食药监械（准）字2012第3400226号

【产品标准编号】YZB国5943-2011

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